一、臨床細(xì)菌室開(kāi)展厭氧細(xì)菌培養(yǎng)的必要性。
1．厭氧菌感染的廣泛性：厭氧菌是一大群在無(wú)氧環(huán)境下生長(zhǎng)的細(xì)菌。厭氧細(xì)菌學(xué)是研究微觀生態(tài)平衡、失調(diào)和調(diào)整的重要部分，在消化道菌群中，99.9%以上為厭氧菌，組成了重要的膜菌群，在生物拮抗、營(yíng)養(yǎng)、免疫等方面具有不可估量的生理意義。
近10年來(lái)，無(wú)芽胞厭氧桿菌及球菌是細(xì)菌性感染的重要原因之一，當(dāng)深部膿腫、敗血癥等常規(guī)細(xì)菌學(xué)檢查陰性時(shí)，往往源于厭氧菌感染。厭氧菌感染是一種內(nèi)源性感染，病種遍及臨床各科，人體的各個(gè)部位，各種器官均可發(fā)生厭氧菌感染。據(jù)廣獻(xiàn)報(bào)道。在菌血癥中有10%可檢出厭氧菌，在牙源性口面部感染病例中有94%，在吸入性肺炎及肺膿腫時(shí)有93%，在婦產(chǎn)科各種感染性疾病中有100%，直腸周圍膿腫有77%可檢出厭氧菌，而且有相當(dāng)一部分病例是單一的厭氧菌感染。
2．厭氧菌感染在診斷和治療上的特殊性：檢出厭氧菌須具備必要的條件，如有特殊的厭氧培養(yǎng)系列，包括特殊采樣方式、培養(yǎng)基、鑒定試劑及設(shè)備等。一旦確診厭氧菌感染，在治療也有其特殊性。
臨床常用的氨基糖苷類抗生素，磺胺類藥物對(duì)厭氧菌無(wú)效。脆弱類桿菌由于產(chǎn)生β內(nèi)酰胺酶可對(duì)青霉素、頭孢菌類β內(nèi)酰胺抗生素耐藥。為了有效控制臨床感染性疾病，shou先必須明確感染源，是需氧菌還是厭氧菌，因此臨床細(xì)菌室有必要把厭氧菌培養(yǎng)作為常規(guī)細(xì)菌檢驗(yàn)。
二、臨床細(xì)菌室開(kāi)展厭氧菌培養(yǎng)現(xiàn)狀
1． 根據(jù)我室1997-2001年調(diào)查結(jié)果表明：我G100家臨床細(xì)菌室開(kāi)展厭氧 菌培養(yǎng)的情況：從未開(kāi)展厭氧菌培養(yǎng)的占77%，未作為常規(guī)項(xiàng)目的占10%，不規(guī)范開(kāi)展的占8%，能作為常規(guī)項(xiàng)目，并規(guī)范開(kāi)展的僅占5%。
2． 我G厭氧菌培養(yǎng)設(shè)備病狀：約95%以上的細(xì)菌室沒(méi)有厭氧手套箱，在能開(kāi)展厭氧菌培養(yǎng)的實(shí)驗(yàn)室中約98%實(shí)驗(yàn)室用厭氧缺罐作為厭氧檢測(cè)設(shè)備。極個(gè)別的實(shí)驗(yàn)室具備用氣相色譜儀鑒定菌種。有90%實(shí)驗(yàn)室無(wú)鑒定厭氧菌的設(shè)備。幾乎所有臨床細(xì)菌室均不開(kāi)展厭氧菌藥敏試驗(yàn)。
3． 采樣方式：采樣應(yīng)規(guī)范、正確。但有些實(shí)驗(yàn)室用新鮮羊血瓊脂代替厭氧培養(yǎng)基；用注射器作為厭氧菌輸送厭氧培養(yǎng)標(biāo)本的工具。這種操作模式，從標(biāo)本離開(kāi)人體到厭氧環(huán)境可能會(huì)使70%-80%的厭氧菌已不能存活。建議應(yīng)盡量采納床邊采樣方式，或用厭氧輸送培養(yǎng)基，解決標(biāo)本不能立即送檢的問(wèn)題。有自動(dòng)血培養(yǎng)分析儀的實(shí)驗(yàn)室，應(yīng)充分利用設(shè)備中厭氧血培養(yǎng)瓶檢測(cè)血液、濃液等無(wú)菌體液中的厭氧菌，但應(yīng)注意勿將注射器中的氣體注入瓶?jī)?nèi)。
三、臨床細(xì)菌室開(kāi)展厭氧培養(yǎng)的可行性
1． 臨床醫(yī)生已認(rèn)識(shí)到厭氧菌在感染性疾病的重要性，能認(rèn)真采樣和送檢，并能識(shí)別厭氧菌感染的重要特征，如感染局部產(chǎn)生氣體，分泌物有惡臭、帶血或呈黑色，感染部位在肛門(mén)、口腔、鼻竇、咽頰等粘膜周圍；有菌血癥表現(xiàn)，但細(xì)菌培養(yǎng)陰性，長(zhǎng)期使用氨基糖甙類抗生素?zé)o效者。
2． 臨床醫(yī)生一般希望通過(guò)細(xì)菌檢驗(yàn)報(bào)告盡快證實(shí)有無(wú)厭氧菌感染，而不是某一種菌，因此，每個(gè)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)加強(qiáng)厭氧菌的分離，再根據(jù)條件建立簡(jiǎn)易鑒定流程或復(fù)雜流程；或以涂片方式報(bào)告，如革蘭陽(yáng)性厭氧球菌、厭氧桿菌；革蘭陰性厭氧桿菌、厭氧球菌。有條件的實(shí)驗(yàn)室可在耐氧試驗(yàn)陽(yáng)性的菌株中進(jìn)一步鑒定，以確定菌種類型。
3． 厭氧菌培養(yǎng)分離、鑒定，試劑的商品化，減輕了實(shí)驗(yàn)室準(zhǔn)備試劑的負(fù)擔(dān)。如價(jià)廉、簡(jiǎn)易的厭氧培養(yǎng)系統(tǒng)，厭氧盒為600-1000元/個(gè)；可靠的厭氧鑒定系統(tǒng)如API、VITEK及其他細(xì)菌鑒定系統(tǒng)均具有厭氧菌鑒定功能。自動(dòng)化血培養(yǎng)分析系統(tǒng)均有厭氧血培養(yǎng)瓶，便于血、胸腹水等無(wú)菌體液的厭氧菌培養(yǎng)。
4． 美G臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)已推薦出可作為厭氧菌藥敏試驗(yàn)的方法，如濃度梯度（Etest）法、瓊脂稀釋法等。當(dāng)用常規(guī)厭氧菌藥物治療無(wú)效時(shí)，可做藥敏試驗(yàn)，用于糾正原有方案。
四、臨床細(xì)菌室要不斷完善，以適應(yīng)臨床需要
1． 臨床細(xì)菌室工作人員要提高對(duì)厭氧細(xì)菌的檢測(cè)技術(shù)，要熟悉常見(jiàn)厭氧菌的分類學(xué)及進(jìn)展。要了解厭氧細(xì)菌在人體各部位的正常菌群和常見(jiàn)的厭氧致病菌。要學(xué)習(xí)厭氧培養(yǎng)的新技術(shù)，指導(dǎo)臨床正確采樣和輸送標(biāo)本。
2． 厭氧培養(yǎng)的基本條件：（1）標(biāo)本采集及運(yùn)送：任何標(biāo)本采用床邊連接種均是可取的，不能及時(shí)送檢的標(biāo)本，必須立即種入輸送培養(yǎng)基，在允許時(shí)間內(nèi)送檢。胸腔、膀胱穿刺液，深部膿腫分泌物。女性殖器后穹隆穿刺物、壞死組織，均可作為厭氧標(biāo)本。但咳出的痰、支氣管分泌物、咽拭子及尿液，均不能作為厭氧菌培養(yǎng)標(biāo)本。糞便標(biāo)本只能用于難辨梭菌培養(yǎng)。（2）厭氧菌培養(yǎng)**的基礎(chǔ)培養(yǎng)基：斯氏瓊脂加5%羊血，適用于所有厭氧菌生長(zhǎng)。斯氏血瓊脂加萬(wàn)古霉素可用于革蘭陰性厭氧細(xì)菌的分離。
在進(jìn)行有目標(biāo)性厭氧菌培養(yǎng)時(shí)，實(shí)驗(yàn)室可配制幾種選擇性培養(yǎng)基。如阿米卡星、萬(wàn)古霉素溶血平板，適用于類桿菌屬的分離。阿米卡星膽鹽七葉苷培養(yǎng)基，適用于脆弱類桿菌的分離。難辨梭菌分離培養(yǎng)基用于難辨梭菌的分離。（3）厭氧菌的鑒定，根據(jù)實(shí)驗(yàn)室的條件不同，分別建立1、2、3級(jí)的鑒定。1級(jí)鑒定可根據(jù)耐氧試驗(yàn)結(jié)果、革蘭染色反應(yīng)、菌落特點(diǎn)，提供厭氧菌初步推斷報(bào)告。2級(jí)鑒定根據(jù)革蘭染色、鏡下形態(tài)、菌落特點(diǎn)及傳統(tǒng)生化反應(yīng)初步鑒定到種。3級(jí)鑒定采用G際公認(rèn)的標(biāo)準(zhǔn)化鑒定系統(tǒng)，如API 20 A、MICRO-OID、VITEK-ANI、氣液色譜儀等設(shè)備鑒定。（4）厭氧菌藥敏試驗(yàn)：厭氧菌感染以經(jīng)驗(yàn)用藥為主，因?yàn)閰捬蹙鷮?duì)現(xiàn)已上市的藥物的敏感性有非常合理的預(yù)測(cè)性。厭氧菌的藥敏試驗(yàn)耗時(shí)太長(zhǎng)（4-6d），因此一般情況下不需要作藥敏試驗(yàn)。當(dāng)經(jīng)驗(yàn)用藥無(wú)效，或評(píng)價(jià)一種新的抗厭氧菌藥物，或耐藥監(jiān)測(cè)時(shí)也需要做藥敏試驗(yàn)。當(dāng)大批量樣品檢測(cè)時(shí)，采用瓊脂稀釋法**為理想，但當(dāng)個(gè)別菌株需做藥敏試驗(yàn)時(shí)，用Etest法或ATB的ANA試條的方法較為方便。（5）厭氧菌的菌種保存：一般在以下3種情況下需要保存菌株，如疑難菌株的回顧性鑒定，需要用菌株制備生物制品或用于科研的菌株需要長(zhǎng)期保存。不同類別厭氧菌保存方法不同，如革蘭陽(yáng)性芽孢桿菌可用蒸餾水低溫保存。革蘭陽(yáng)性厭氧球菌或桿菌采用血液低溫保存較好。-40℃以下較為合適，因?yàn)樵诘蜏貢r(shí)新陳代謝處于抑制狀態(tài)，不繁殖、不死亡，并且血液在低溫下可形成低氧化還原電勢(shì)。冷凍干燥保存菌株適用于所有厭氧菌。 五、厭氧細(xì)菌學(xué)研究進(jìn)展及展望 #p#分頁(yè)標(biāo)題#e#
1．厭氧菌檢測(cè)方法學(xué)進(jìn)展，用胞外酶原理設(shè)計(jì)的鑒定系統(tǒng)，不需要在厭氧環(huán)境中培養(yǎng)。厭氧氣體發(fā)生劑的改進(jìn)，不需要在發(fā)生袋中加水，不需要觸酶，大大簡(jiǎn)化了操作步驟。全自動(dòng)細(xì)菌鑒定系統(tǒng)的問(wèn)世，為厭氧菌鑒定創(chuàng)造了更為便利和快捷的條件。
2．分子生物學(xué)技術(shù)介入?yún)捬跫?xì)菌學(xué)的研究和檢測(cè)，大大縮短了報(bào)告時(shí)間。對(duì)厭氧菌的鑒定由一般表型特征的鑒定深化為遺傳性特征的鑒定。目前聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)已應(yīng)用到臨床，直接從標(biāo)本中檢測(cè)厭氧致病菌，應(yīng)用擴(kuò)增16S核蛋白DNA限制性分析法鑒定放線菌。 在研究厭氧菌的耐藥機(jī)理方面，已發(fā)現(xiàn)革蘭陰性厭氧菌如脆弱類桿菌、卟啉單胞菌的孔狀分子結(jié)構(gòu)與其耐藥性有關(guān)，并在真核細(xì)菌和彎曲菌屬中有結(jié)構(gòu)類似的孔狀分子結(jié)構(gòu)，位于細(xì)菌外膜，并了解到這種結(jié)構(gòu)與細(xì)菌膜滲透性下降導(dǎo)致耐藥有關(guān)。
展望：雖然實(shí)驗(yàn)科學(xué)的快速發(fā)展推動(dòng)了厭氧細(xì)菌的研究，但與臨床需要相比還有很大差距，如厭氧菌分離需要時(shí)間過(guò)長(zhǎng)（48-72h）、費(fèi)用高、開(kāi)展不普及。今后的任務(wù)shou先要從普及入手，分子生物學(xué)方法要著眼于臨床需要，建立正確便捷的檢測(cè)方法，使每一個(gè)細(xì)菌室都能開(kāi)展厭氧菌培養(yǎng)。此外，在基礎(chǔ)理論方面，要深入研究厭氧菌感染的病因、致病因素和免疫機(jī)理，從而有效地預(yù)防和治療厭氧菌感染。
